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分子實驗室如何選擇核酸提取儀?
發(fā)布日期:2022/11/3 9:13:40

隨著分子生物學技術的高速發(fā)展,以核酸雜交、核酸擴增及核酸序列分析等為代表的分子診斷和檢測技術的重要作用日益凸顯。樣品前處理所花費的時間占整個分析過程的60%,而檢測誤差的90%出現(xiàn)在前處理領域。核酸提取作為分子診斷實驗的“第一步”,也是最關鍵的一步,其獲得的核酸質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響到下游分子生物學試驗的成敗。

國內(nèi)的二級醫(yī)院、三級醫(yī)院、疾控中心、第三方檢測等符合國家新冠檢測要求的機構,依然會不斷的接收到大量的新冠檢測需求。同時,已經(jīng)有很多省份出臺政策文件,進行了全省范圍內(nèi)的醫(yī)院擴建,特別是二級醫(yī)院。面對市場上五花八門的產(chǎn)品,如何選擇一款合適的核酸自動提取儀,就得細細分析。

1.核酸提取原理

1.1

采用離心柱法的儀器

離心柱法核酸提取儀主要采用離心機和自動移液裝置相結合的方法,通量一般在1-12個樣本,操作時間和手工提取差不多,并不能提高實際工作效率,且價格昂貴,不同型號儀器的耗材也不能通用,僅適合經(jīng)費充足的大型實驗室使用。

1.2

采用磁珠法的儀器

以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸,在低鹽高PH值下與核酸分離的原理,再通過移動磁珠或轉移液體來實現(xiàn)核酸的整個提取純化過程。由于其原理的獨特性,所以可設計成很多種通量,既可以單管提取,也可以提取8-96個樣本,且其操作簡單快捷,一批次上機提取時間為9~40min(不同樣本不同廠家時間不同),大大提高了實驗效率,且成本低廉,因而可以在不同實驗室使用,是目前市場上的主流儀器。

磁珠法自動核酸提取儀又分為磁棒法和抽吸法

1.2.1

抽吸法

顧名思義,抽吸法就是通過自動移液裝置來進行。磁鐵分為2種裝置,磁鐵在底部和側面。抽吸法最大的問題在于,為了在去除廢液的時候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠連同廢液被抽掉。1)磁鐵在底部的裝置,因為磁珠被磁鐵吸附在底部,這樣漂洗液就不能完全去除,殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會影響后面的洗脫效率和PCR成功率;2)磁鐵在側面的裝置殘留的液體會少些,但是洗脫的效率也不好,依靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中,除非等上半小時以上,所以有些96自動核酸提取工作站,提取一輪的時間需要150分鐘,32磁棒法的同樣的時間可以提5輪了。

1.2.2

磁棒法核酸提取儀

通量通常有8、16、32、96通道,磁棒只帶走磁珠,轉移到下一個步驟相應的反應孔中,另外選擇磁棒法的提取儀器最好要功能更齊全的,比如可以加熱,每個加熱槽最好獨立溫控,這樣可以設置加熱、裂解、洗脫的不同溫度,另外很重要的一點是,帶動磁棒的電機要能帶動磁棒進行液體的快速混勻和攪拌,這樣才有利于自動化和有助于裂解和漂洗徹底。

磁棒法核酸提取儀混勻方式

1)    震蕩混勻:通過磁棒的上下震動混勻磁珠和核酸,為市面上主流方法

2)    旋轉混勻:通過磁棒的旋轉混勻磁珠和核酸,相比傳統(tǒng)的振蕩式混勻技術,氣溶膠的產(chǎn)生量大幅降低50%以上。交叉污染而導致的假陽性風險被更有效控制,進一步保障實驗結果的準確性。另外,旋轉的混勻方式最大限度的保留了DNA的長鏈,減少核酸機械的斷裂,提高后續(xù)檢測的靈敏度。

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